大腦中動(dòng)脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性腦缺血模型，MCAO 模型先阻斷頸外動(dòng)脈（ECA）及其分支，且阻斷翼腭動(dòng)脈（PPA），以切斷顱外來(lái)源的側(cè)副循環(huán)血流。從ECA 插入尼龍線，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）到大腦前動(dòng)脈（ACA），機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈（MCA） 發(fā)出處的血供來(lái)建立大腦中動(dòng)脈缺血模型。此模型可在無(wú)麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復(fù)血流，實(shí)現(xiàn)再灌注。 線栓法具有不開(kāi)顱、效果肯定、可準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)，用于研究神經(jīng)元對(duì)缺血的敏感性、耐受性，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時(shí)間窗較為理想，同時(shí)也具有對(duì)全身影響小、動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，適于慢性腦損傷的研究?？刂坪靡鬃円蛩兀杀苊鈱?shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性。
1、主要器材
（1）缺血前準(zhǔn)備：腦立體定位儀、（小鼠適配器）、微量注射泵、微量注射器、顱鉆
（2）缺血模型制作：氣體麻醉機(jī)、異氟烷、體視顯微鏡、冷光源、手術(shù)臺(tái)、術(shù)后保溫箱、腦模具、手術(shù)器械包
（3）缺血模型評(píng)價(jià)：神經(jīng)功能評(píng)價(jià)法（BBB評(píng)分）、TTC染色、病理學(xué)評(píng)價(jià)
（4）缺血后行為檢測(cè)：抓力測(cè)試儀、轉(zhuǎn)棒儀......
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
（1）SPF級(jí)Wistar大鼠，健康，雄性，體重為250-300g。
（2）SPF級(jí)C57小鼠，健康，雄性，體重為18 - 25g，實(shí)驗(yàn)Protocol和視頻，請(qǐng)點(diǎn)擊觀看和下載: Click Here
3、實(shí)驗(yàn)分組
實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。
4、建模方法（以大鼠為例）
（1）1.5-2%異氟烷氣體麻醉大鼠，頸部備皮，消毒，插入肛溫探頭，保持體溫在37±0.5℃。
（2）頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。使用6-0絲線在距離頸總動(dòng)脈分叉4mm處結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，在頸外動(dòng)脈穿入另一根6-0絲線，在靠近頸總動(dòng)脈分叉處打一個(gè)活結(jié)。
（3）使用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈。在距離頸總動(dòng)脈分叉處3mm處的頸外動(dòng)脈上剪一個(gè)小口，將一根頭端處理過(guò)的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入，進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，并向內(nèi)插入大腦中動(dòng)脈，尼龍線的插入深度距離頸總動(dòng)脈分叉處約16±1mm。
（4）缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結(jié)扎外動(dòng)脈近心端，用3-0絲線縫合頸部傷口，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上，待清醒后放入恒溫?fù)狃B(yǎng)箱飼養(yǎng)。
（5）術(shù)后24h，對(duì)小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，然后繼續(xù)麻醉大鼠，取大腦切片、進(jìn)行TTC染色和病理染色。
5、模型的評(píng)價(jià)
（1）神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分
參考 Longa 及Bederson 的5 分制法在動(dòng)物麻醉清醒后24h 進(jìn)行評(píng)分，分值越高,說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。
0 分：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀
1分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪
2分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈
3分：向?qū)?cè)傾倒
4分：不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失
（2）TTC染色
麻醉大鼠后 ，取大鼠腦組織 ，放入 -20 ℃冰箱冷凍 30min 30min。用 PBS配置 1% TT C（W/V ），37 ℃水浴至 TTC 溶解， 將凍好的腦組織切片 ，置于 10ml TTC 溶液 中， 37 ℃恒溫孵育 10min。不時(shí)翻動(dòng)腦片，使 組織均勻染色。正常腦染色后呈鮮紅，而梗死區(qū)呈蒼白。
附：小鼠缺血2h后TTC染色效果圖，如下：

（3）病理學(xué)評(píng)價(jià)
取腦后用 4% 多聚甲醛溶液 固定，蔗糖溶液脫水后經(jīng) 固定，蔗糖溶液脫水后經(jīng) 固定，蔗糖溶液脫水后經(jīng) OCT 包埋做冰凍切片 ，包埋做冰凍切片 ，10um ， 做尼氏染色， 做尼氏染色可做梗死面積的評(píng)價(jià)。

全套配置清單：

序號(hào)	貨號(hào)	型號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格描述	單位	數(shù)量	備注
1	10-0030	Nova1000	小動(dòng)物麻醉機(jī)（集成移動(dòng)型）	0-5%異氟烷麻醉，移動(dòng)型，POUR FILL、CAGE MOUNT，集供氣、快麻、維持麻醉、快氧、廢氣清除等功能一體化。集成功能配置：移動(dòng)支架、內(nèi)置氣源泵、抽氣泵、廢氣吸收罐、大小鼠預(yù)麻箱、抽屜箱、置物籃及管路	套	1
2	10-2151		小鼠麻醉面罩	同軸管、內(nèi)徑Ø10MM*外徑Ø23MM	套	1
3	16-0110	SM700B	小鼠MCAO手術(shù)專(zhuān)用顯微鏡		套	1
4	36-0000	TC200	小動(dòng)物保溫儀（術(shù)中）	保溫、直腸測(cè)溫	套	1
5	10-2104		小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)（小鼠MCAO專(zhuān)用）	170*120*14MM	臺(tái)	1
6	14-3003		線栓（22-25g小鼠）	0.21MM（50根/包）	包	1	其他體重范圍的線栓可選
7	14-2100		腦模具	15-30G小鼠，冠狀，1MM	個(gè)	1
8	14-2101		腦模具	15-30G小鼠，矢狀，1MM	個(gè)	1
9	18-8050		腦缺血手術(shù)器械包	15件套	套	1
10	18-8090		動(dòng)物手術(shù)消毒套裝	7件套	套	1
11	65-0000		小鼠電子秤	量程200G，精確度0.001g，圓盤(pán)	臺(tái)	1
12	19-7001		小動(dòng)物剃毛器		套	1
13	10-3026		活性炭	6袋/箱	箱	1	耗材
14
15			染色成像及讀片儀		套	1
16			行為、運(yùn)動(dòng)學(xué)檢測(cè)評(píng)判系統(tǒng)	采用迷宮、步態(tài)等多維度綜合評(píng)判分析	套	1